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医疗器械咨询据国家药监局2022年1月26日关于发布贴敷类医疗器械中17种化学药物识别及含量测定补充检验方法的公告(2022年 第12号)，根据《医疗器械监督管理条例》第七十六条规定，国家药监局审核批准《贴敷类医疗器械中17种化学药物识别及含量测定补充检验方法》具体内容如下：
贴敷类医疗器械中17种化学药物识别及含量测定补充检验方法
1 适用产品范围
本方法适用于以物理升温、物理退热、穴位压力刺激或者磁场作用等原理的贴敷类医疗器械。品名举例：远红外治疗贴、医用冷敷贴、医用退热贴、冷敷凝胶、磁疗贴、穴位压力刺激贴等。
本方法不适用于以铁粉氧化升温致热为工作原理的热疗贴、热灸贴等产品。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 通则
3.1本方法中的室温，如无特殊规定，应为10 ℃～30 ℃。
3.2本方法中试验用水应符合GB/T 6682的要求。
3.3本方法中所用容器如无特殊规定，应为硅硼酸盐玻璃容器。
3.4本方法中所涉及的量取，应使用符合相应国家标准规定的准确度要求的移液管量取。
4 测定方法
4.1 概述
高效液相色谱仪的二极管阵列检测器(DAD)能够进行全波长扫描，灵敏度较高，且应用普遍、易于操作。高分辨的一级(MS)、二级质谱(MS2)数据能够给出更加准确可靠的结构信息。本方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行初筛，高分辨液质联用法(HRMS/MS)或等效的液质联用法进行验证，验证后的阳性样品采用高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。
4.2 供试液的制备
取样品1贴，撕开不粘层，展开，贴在定量滤纸上，用剪刀裁去多余滤纸，然后将样品剪成0.5 cm×0.5 cm的小片，置于150 mL烧瓶中，加入甲醇适量将样品完全浸没，70 ℃回流两次，每次2 h。将浸提液转移至100 mL容量瓶中，用少量甲醇洗涤样品三次，合并洗涤液至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。取上述溶液经0.2 μm微孔滤膜过滤后作为供试液，必要时可进行适当倍数的稀释。
4.3高效液相色谱法
4.3.1 仪器与试剂
4.3.1.1 仪器
高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。
4.3.1.2 试剂
a)甲醇：色谱纯，CAS# 67-56-1;
b)乙腈：色谱纯，CAS# 75-05-8;
c)磷酸：分析纯，CAS# 7664-38-2;
d)17种药物信息见表1。
表1 17种药物信息
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编号 |
名称 |
CAS号 |
分子式 |
|
1 |
氨基比林 |
58-15-1 |
C13H17N3O |
|
2 |
甲氧苄啶 |
738-70-5 |
C14H18N4O3 |
|
3 |
对乙酰氨基酚 |
103-90-2 |
C8H9NO2 |
|
4 |
泼尼松 |
53-03-2 |
C21H26O5 |
|
5 |
氢化可的松 |
50-23-7 |
C21H30O5 |
|
6 |
地塞米松 |
50-02-2 |
C22H29FO5 |
|
7 |
水杨酸甲酯 |
119-36-8 |
C8H8O3 |
|
8 |
醋酸泼尼松 |
125-10-0 |
C23H28O6 |
|
9 |
醋酸可的松 |
50-04-4 |
C23H30O6 |
|
10 |
酮洛芬 |
22171-81-5 |
C16H14O3 |
|
11 |
萘普生 |
22204-53-1 |
C14H14O3 |
|
12 |
醋酸地塞米松 |
1177-87-3 |
C24H31FO6 |
|
13 |
保泰松 |
50-33-9 |
C19H20N2O2 |
|
14 |
氟比洛芬 |
5104-49-4 |
C15H13FO2 |
|
15 |
布洛芬 |
15687-27-1 |
C13H18O2 |
|
16 |
吲哚美辛 |
53-86-1 |
C19H17ClNO4 |
|
17 |
双氯芬酸钠 |
15307-79-6 |
C14H10Cl2NNaO2 |
表2 HPLC法流动相梯度条件
|
时间（min） |
A（%） |
B（%） |
|
0 |
94 |
6 |
|
8 |
45 |
55 |
|
20 |
45 |
55 |
|
25 |
10 |
90 |
|
26 |
10 |
90 |
|
26.5 |
94 |
6 |
|
30 |
94 |
6 |
4.3.4系统适应性试验
4.3.4.1 分离度
取4.3.2中17种药物对照品储备溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成浓度为10 mg/L的混合对照溶液，取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，17种对照品的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5。
4.3.4.2 灵敏度
取4.3.2中17种药物对照品储备溶液适量，分别用甲醇稀释至表3中“检出限(LOD)”的浓度，取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，17种对照品的色谱峰信噪比(S/N)均应大于3:1。
表3 17种药物灵敏度要求
|
编号 |
名称 |
检出限LOD （mg/L） |
|
1 |
氨基比林 |
1.5 |
|
2 |
甲氧苄啶 |
0.2 |
|
3 |
对乙酰氨基酚 |
0.2 |
|
4 |
泼尼松 |
0.2 |
|
5 |
氢化可的松 |
0.2 |
|
6 |
地塞米松 |
0.2 |
|
7 |
水杨酸甲酯 |
0.5 |
|
8 |
醋酸泼尼松 |
0.5 |
|
9 |
醋酸可的松 |
0.5 |
|
10 |
酮洛芬 |
0.2 |
|
11 |
萘普生 |
0.05 |
|
12 |
醋酸地塞米松 |
0.5 |
|
13 |
保泰松 |
0.5 |
|
14 |
氟比洛芬 |
0.5 |
|
15 |
布洛芬 |
0.5 |
|
16 |
吲哚美辛 |
0.5 |
|
17 |
双氯芬酸钠 |
0.2 |
4.4高分辨液质联用法
4.4.1 仪器与试剂
4.4.1.1 仪器
高分辨液质联用仪
4.4.1.2 试剂
a)甲醇：质谱纯，CAS# 67-56-1;
b)乙酸铵：质谱纯，CAS# 631-61-8;
c)17种药物对照品同4.3.1.2 d)。
4.4.2对照品溶液配制
同4.3.4.1中浓度为10 mg/L的混合对照溶液配制。
4.4.3色谱条件(示例)
4.4.3.1色谱柱：Hypersil Gold 100×2.1 mm 1.9 μm，或其他等效色谱柱。
4.4.3.2 柱温：40 ℃，样品室温度：10 ℃;
4.4.3.3 流速：0.2 mL/min;
4.4.3.4 检测波长：220 nm;
4.4.3.5进样量：2 μL。
4.4.3.6 流动相：A(10 mmol/L乙酸铵的水溶液) B(甲醇)，梯度条件见表4。
表4 HPLC-HRMS/MS法流动相梯度条件
|
时间（min） |
A （%） |
B （%） |
|
0 |
90 |
10 |
|
1 |
90 |
10 |
|
7 |
5 |
95 |
|
11 |
5 |
95 |
|
12 |
90 |
10 |
|
15 |
90 |
10 |
4.4.4质谱条件(示例)
4.4.4.1 仪器型号：Themo Q-Exactive Focus型高分辨液质联用仪。
4.4.4.2 离子源：ESI 扫描模式：正负切换;
4.4.4.3 鞘气：30 arb 辅助气：8 arb 吹扫气：0 arb;
4.4.4.4 电喷雾电压：3.0 kV;
4.4.4.5 毛细管温度：320 ℃;
4.4.4.6 传输透镜电压：55.0 %;
4.4.4.7 辅助气加热温度：300 ℃;
4.4.4.8 17种药物测定参数见表5。
表5 17种药物检测模式、二级能量及碎片离子
|
编号 |
名称 |
检测
模式 |
m/z |
碎片信息 |
能量（NCE） |
|
1 |
氨基比林 |
﹢ |
232.1444 |
113*,139,187,217 |
20 |
|
2 |
甲氧苄啶 |
﹢ |
291.1452 |
123*,201,245,261,275 |
50 |
|
3 |
对乙酰氨基酚 |
﹢ |
152.0706 |
65,92,110*,134 |
50 |
|
4 |
泼尼松 |
﹢ |
359.1853 |
147*,237,313,341 |
25 |
|
5 |
氢化可的松 |
﹢ |
363.2176 |
97,121*,173,267,309,327,345 |
25 |
|
6 |
地塞米松 |
+ |
393.2072 |
147,237,319,337,355*,373 |
15 |
|
7 |
水杨酸甲酯 |
﹣ |
151.0390 |
75,91*,93,119,121 |
60 |
|
8 |
醋酸泼尼松 |
﹢ |
401.1959 |
147,237,295*,313,341,383 |
18 |
|
9 |
醋酸可的松 |
﹢ |
403.2115 |
101,163 *,325,343,361 |
25 |
|
10 |
酮洛芬 |
﹢ |
255.1017 |
105,177,209* |
21 |
|
11 |
萘普生 |
﹢ |
231.1017 |
170,185* |
20 |
|
12 |
醋酸地塞米松 |
﹢ |
435.2177 |
147,237,309,397*,415 |
15 |
|
13 |
保泰松 |
﹢ |
309.1598 |
120,146,160 *,211 |
35 |
|
14 |
氟比洛芬 |
- |
243.0817 |
199* |
20 |
|
15 |
布洛芬 |
﹣ |
205.1223 |
159* |
10 |
|
16 |
吲哚美辛 |
﹣ |
356.0684 |
111,297,312* |
10 |
|
17 |
双氯芬酸钠 |
﹣ |
294.0094 |
250* |
10 |
注：*为基峰
4.5药物识别及其含量测定
取4.2制备的供试液及4.3.4.1制备的10 mg/L的混合对照溶液，按照4.3.3的方法进样分析。将二者结果进行对比，以保留时间(tR)及190 nm~400 nm的紫外光谱图一致性作为初筛依据。
取可能含有药物的供试液及相应药物对照品溶液，按照4.4.3、4.4.4的方法进样分析。将供试液与对照品溶液的母离子及碎片离子信息进行对比，二者一致则确认该样品中含有相应的药物成分。
取4.3.2中阳性样品中所含药物的对照品储备溶液，配制成系列浓度的标准溶液，按照4.3.3的方法进样分析。绘制浓度-峰面积标准曲线，根据峰面积计算样品中药物的量。图1给出了17种药物的典型色谱图。
图1 17种药物典型
4.6其他药物识别方法
本方法中给出了17种药物的识别和含量测定方法，如关注其他可能添加的药物，也可采用经方法学验证的方法进行分析。
5 结果判定
供试液中不得检出上述17种药物成分(检出限见表3)。
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